Estandarización de un método para la extracción de DNA a partir de muestras clínicas parafinadas
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Resumen
La epidemiología molecular estudia variaciones genotípicas relacionándolas con diversos procesos biológicos, entre ellos los patológicos como el cáncer. Por ello el análisis de muestras clínicas parafinadas es de gran importancia para el diagnóstico, la prevención y la terapia. Se ha informado con anterioridad muchos problemas relacionados con la amplificación de DNA obtenido a partir tejido embebido en parafina (TEP). En este trabajo se comparó la capacidad de 9 metodologías para obtener DNA a partir de TEP y amplificarlo por PCR para analizar fragmentos de menos de 250 pb correspondientes con polimorfismos presentes en enzimas pertenecientes a la vía del folato. El método modificado de Salting-out con NaCl de 0,5 M, CTAB 2 % como detergente y Proteinasa K fue el más adecuado para obtener DNA amplificable considerando los amplicones elegidos. Todos los métodos mostraron una mejor amplificación con ciclos más prolongados y temperaturas de annealing menores comparado con DNA más íntegro.
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